1983年KaryMullis發(fā)明PCR技術(shù)以來,PCR實(shí)驗(yàn)歷經(jīng)了“三級(jí)跳躍式”的發(fā)展歷程。
從最早期的手工操作PCR反應(yīng),到半自動(dòng)機(jī)械臂在水浴中操作PCR反應(yīng),再到目前已經(jīng)非常成熟的半導(dǎo)體(Peltier)溫控技術(shù),PCR設(shè)備對(duì)操作人員來說已經(jīng)變得越來越友好,越來越便利。
早期的PCR條件優(yōu)化只能一次又一次地不停嘗試各種實(shí)驗(yàn)條件的組合,直到90年代中期Eppendorf在5331系列PCR上實(shí)現(xiàn)了不同列之間不同溫度的功能,一次實(shí)驗(yàn)就能夠測(cè)試12個(gè)不同的條件,一下子將PCR實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化的效率提高了10倍以上,這也是我們所熟知的PCR梯度功能。
PCR儀作為一個(gè)成熟的設(shè)備,是否還有發(fā)展的空間呢?
答案是肯定的,Eppendorf在最新的Mastercycler®X50系列PCR儀上引入了創(chuàng)新的2D梯度功能。
世界著名的MPICBG(MaxPlanckInstituteofMolecularCellBiologyandGenetics)的科學(xué)家,在使用了EppendorfMastercycler®X50的2D梯度功能后表示,使用2D梯度可以非常方便地在一次實(shí)驗(yàn)中對(duì)PCR反應(yīng)過程中的兩個(gè)溫度步驟進(jìn)行優(yōu)化(如,變性與退火),一次可以摸索96個(gè)不同的溫度條件組合。
這樣的條件優(yōu)化對(duì)于難以擴(kuò)增的高GC含量的模板的條件優(yōu)化顯得尤為重要。
而這使得PCR條件優(yōu)化的過程有了全新的可能性。